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載體(vector)是在基因工程重組DNA技術(shù)中將DNA片段(目的基因)轉(zhuǎn)移至受體細胞的一種能自我復(fù)制的DNA分子。三種最常用的載體是細菌質(zhì)粒、噬菌體和細菌病毒和動植物病毒。
運轉(zhuǎn)載體
在基因操作過程中使用運載體有兩個目的:一是用它作為運載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細胞中去;二是利用它在宿主細胞內(nèi)對目的基因進行大量的復(fù)制(稱為克隆)。現(xiàn)在所用的運載體主要有兩類:一類是細菌細胞質(zhì)的質(zhì)粒,它是一種相對分子質(zhì)量較小、獨立于染色體DNA之外的環(huán)狀DNA(一般有1~200 kb左右,kb為千堿基對),有的一個細菌中有一個,有的一個細菌中有多個。質(zhì)粒能通過細菌間的接合由一個細菌向另一個細菌轉(zhuǎn)移,可以獨立復(fù)制,也可整合到細菌染色體DNA中,隨著染色體DNA的復(fù)制而復(fù)制。另一類運載體是噬菌體或某些病毒等。現(xiàn)在人們還在不斷尋找新的運載體,如葉綠體或線粒體DNA等也有可能成為運載體。
作為運載體必須具有三個條件
①在宿主細胞中能保存下來并能大量復(fù)制;②有多個限制酶切點,而且每種酶的切點最好只有一個,如大腸桿菌pBR322就有多種限制酶的單一識別位點,可適于多種限制酶切割的DNA插入;③有一定的標記基因,便于進行篩選。如大腸桿菌的pBR322質(zhì)粒攜帶氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因,就可以作為篩選的標記基因。一般來說,天然運載體往往不能滿足上述要求,因此需要根據(jù)不同的目的和需要,對運載體進行人工改建?,F(xiàn)在所使用的質(zhì)粒載體幾乎都是經(jīng)過改建的。