吉爾生化(上海)有限公司
上海吉爾多肽有限公司
總機(jī):021-61263333
熱線:4006013200
手機(jī):13917514027
傳真:021-61263300
郵編:200241
郵箱:info@glschina.com
總部地址:上海市紫月路519號(hào)
網(wǎng)址 : www.yw-ak.com
多肽合成是怎樣形成的?
1.做免疫用的多肽多長(zhǎng)為合適?
一般約10-15個(gè)氨基酸,當(dāng)然長(zhǎng)一些免疫效果好一些,不過合成費(fèi)用也會(huì)增加。MAP多肽則希望長(zhǎng)度在15aa以上,效果較好。另外,10aa以下的多肽免疫效果比較差。
2.免疫用多肽的純度需要很高嗎?
一般而言,免疫用Peptide,70-85%即可。
3.我們合成的多肽溶解性不好,多肽就有問題對(duì)嗎?
很難準(zhǔn)確預(yù)測(cè)一個(gè)多肽的溶解性及合適的溶劑是什么。如果多肽難以溶解就認(rèn)為多肽合成有問題這個(gè)觀念并不正確。
4.多肽狀態(tài)是如何?如何保存儲(chǔ)存?
我們提供的多肽是粉末狀,一般為灰白色,組成不同,多肽粉末的顏色有差異,多肽一般長(zhǎng)期保存需要避光保存,并應(yīng)保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短時(shí)間的話是以室溫運(yùn)輸。
5.如何溶解多肽
溶解多肽是非常復(fù)雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點(diǎn)試驗(yàn),在沒有確定合適的溶劑前千萬不要合部溶解。 下列方法有助于您選擇合適的溶劑:
(1)判定多肽的電荷特定,設(shè)定酸性氨基酸Asp(D),Glu(E)和C端COOH為-1;堿性氨基酸Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2為+1,其它氨基酸的電荷為0。計(jì)算出將電荷數(shù)。
(2)如果凈電荷數(shù)>0,多肽為堿性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果多肽還不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(3)如果凈電荷數(shù)<0,多肽為酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀釋。
(4)如果凈電荷數(shù)=0,多肽為中性,一般需要用有機(jī)溶劑如乙腈,甲醇或異丙醇,DMSO等溶解。還有人建議需要尿素來溶解疏水性很大的多肽。
6.非HPLC純化的多肽中有哪些雜質(zhì)?
粗品和脫鹽級(jí)別的多肽中多肽和非多肽類雜質(zhì):如非全長(zhǎng)多肽和多肽后處理的一些原料如DTT、TFA等。
7.HPLC純化的多肽有哪些雜質(zhì)?
經(jīng)過HPLC純化的多肽,仍會(huì)有一些一些雜質(zhì)存在,其中的雜質(zhì)主要是短肽和微量TFA。
8.多長(zhǎng)的多肽為合適?
多肽合成需要考慮多肽的長(zhǎng)度,電荷,親疏水性等因素。長(zhǎng)度越長(zhǎng),合成粗品的純度和產(chǎn)率都隨著降低,純化的難度和無法合成的幾率就會(huì)大些。當(dāng)然多肽功能區(qū)的序列是無法改變的,但是為了多肽的順利合成,有時(shí)不得不在功能取的上下游增加一些輔助氨基酸,以改善多肽的溶解性和親疏水性。如果多肽太短,合成也可能有問題,主要問題是合成的多肽在后處理過程中有一定的難度,5肽以下的多肽,一般要有疏水的氨基酸,否則后處理難度加大。15個(gè)氨基酸殘基以下的多肽一般都可以得到滿意的產(chǎn)率和得率。
9.如何從多肽序列中判定多肽的溶解性?
(1)多肽中如果含有高比例的疏水性很強(qiáng)的氨基酸如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,多肽很難溶解與水性溶液中或根本不可能溶解。這些氨基酸無論是純化或合成,都有可能有問題。
(2)一般情況下疏水性氨基酸的比例<50%,不能連續(xù)5個(gè)連續(xù)aa為疏水性,帶電荷的氨基酸的(正電荷K,R,H,N-terminus,負(fù)電荷D,E,C- terminus)的比例達(dá)到20%,在多肽的N或C短如果能增加極性氨基酸,也可以改善溶解性。 11.為什么含有Cys,Met,或Trp的多肽難合成?
含有Cys,Met,或Trp的多肽難以合成,同時(shí)難以獲得高純度的產(chǎn)品。主要因?yàn)檫@些基團(tuán)不穩(wěn)定,易氧化。這些多肽的使用和儲(chǔ)存都需要特別注意,避免反復(fù)開啟蓋子。