吉爾生化（上海）有限公司
上海吉爾多肽有限公司
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多肽合成步驟及原理
合生生物多肽合成，示范多肽片段：KALKALKKALKALK 15mg 95%
1.根據(jù)理論合生生物計算值稱取0.5g（取代度0.3）二氯樹脂于30 ml的反應(yīng)器中，用50ml的DCM浸泡30min,DMF洗滌3次。
2合生生物稱取片段第一個氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH 150mg，加入DCM將其溶解，然后加入0.2ml的DIEA反應(yīng)1.5-2h。
3.2小時后，用甲醇溶液封頭（甲醇：DIEA:DCM=1：1：2)半小時，然后用DMF洗滌四次，抽干待用。
4.合生生物向反應(yīng)器中加入適量的20%哌啶溶液（哌啶/DMF=1:4），反應(yīng)20 min，以此來脫去Fmoc保護(hù)基團(tuán)。脫完保護(hù)后用DMF洗滌四次，然后抽干。
5.合生生物取少量樹脂用茚三酮法檢測，樹脂有顏色，則脫保護(hù)成功。
6.合生生物稱取片段的C端第二個氨基酸Fmoc-Ala-OH 0.45mmol(第一個氨基酸摩爾量的3倍）和0.45mmol HOBT，加入少量（剛好沒過樹脂）DMF將其溶解，然后合生生物加入0.2 ml的DIC到反應(yīng)器中。
7.半小時后，合生生物取少量樹脂檢測，用茚三酮法檢測，若樹脂有顏色，則縮合不完全,繼續(xù)反應(yīng)；若樹脂為無色，則反應(yīng)完全。
8.待反應(yīng)完全后，合生生物用DMF洗滌樹脂四次，然后抽干，向反應(yīng)器中加入一定量的20%哌啶（哌啶/DMF=1:4），合生生物脫去樹脂上的Fmoc保護(hù)基團(tuán)。脫完保護(hù)后用DMF洗滌四次，合生生物然后抽干。
9.合生生物取少量樹脂用茚三酮法檢測，樹脂有顏色，說明脫保護(hù)成功。
10.合生生物按照步驟7-10依次接上片段1的剩余氨基酸
11.脫去片段1最后一個氨基酸N端的Fmoc保護(hù)。
12.切割：合生生物稱量反應(yīng)后的樹脂加入10倍體積的切割液，反應(yīng)1.5-2h（切割液：95%TFA+2%EDT+2%Tis+1%H2O），濾掉樹脂，加入4-5倍體積的乙醚離心，去掉上清液，合生生物再用乙醚洗滌三次。
13.合生生物通過高效液相色譜儀器（HPLC）將目標(biāo)肽段與雜質(zhì)分離，合生生物將目標(biāo)肽段凍干成粉末，并送合生生物QC質(zhì)檢
14.QC檢測純度（HPLC）,分子量（MS）均合格后，產(chǎn)品包裝發(fā)貨。
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